腺病毒可以构建稳转株吗

发布时间: 2021-12-27 11:59:48 来源: 励志妙语 栏目: 经典文章 点击: 112

腺病毒载体与慢病毒载体哪个更好两种载体各有什么优缺点?与普通的转染方法相比较有什么优势?慢病毒载体转染效率高,可以构建稳定表达细...

腺病毒可以构建稳转株吗

腺病毒载体与慢病毒载体哪个更好

两种载体各有什么优缺点?与普通的转染方法相比较有什么优势?
慢病毒载体转染效率高,可以构建稳定表达细胞系。但是,有可能发生重组的危险,所以要小心。
腺病毒载体做瞬时表达,转染较容易。但是,转染效率不高。

慢病毒和腺病毒的区别?

  慢病毒较好些,要看你做什么实验了。
  1.转染效率:慢病毒较高
  2.慢病毒可以实现稳定转染,腺病毒是瞬时转染
  3.包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因
  4.慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。
  5.安全性:两个差不多
  6.感染细胞类型:都可以感染分裂和不分裂的细胞
  7.免疫原性:腺病毒高免疫原性,慢病毒低免疫原性
  8.腺病毒不能得到转基因动物,慢病毒可以
  9.产生的病毒滴度,腺病毒要高些

腺病毒有约8.5千碱基的容量,具有高水平的蛋白质表达和瞬时基因表达。表达的发作时间可早于感染后16-24小时。腺病毒系统的局限性主要在于靶细胞的高免疫应答。尽管如此,由于它们对大多数组织有高效转导作用,仍被广泛用于研究中。

腺病毒有约8.5千碱基的容量,具有高水平的蛋白质表达和瞬时基因表达。表达的发作时间可早于感染后16-24小时。腺病毒系统的局限性主要在于靶细胞的高免疫应答。尽管如此,由于它们对大多数组织有高效转导作用,仍被广泛用于研究中。

AAV的包装容量约为4.5千碱基,蛋白质表达水平相对较低,有长效基因表达的潜力。 AAV的趋向性也可以通过不同的血清型增强。 AAV的主要缺点是其对目的基因的包装容量较小,并且表达起效较晚(体外2-7天,体内3-21天),然而,该传递系统所产生的免疫应答水平却非常低。    

参考:网页链接

腺病毒:针对大多数细胞有几乎100%的感染效率,包括分裂和不分裂细胞及原代细胞,不整合到宿主细胞。但是构建和包装的操作相对复杂。
逆转录病毒:对于大多数细胞的感染效率<30%,而且依赖细胞的分裂。操作人员需要注意的是,逆转录病毒会整合到宿主细胞的基因组上,并且有引起基因突变、激活癌基因的风险。与腺病毒不同的是,它的构建及包装要比后者简单很多。
慢病毒:对于分裂细胞和非分裂细胞能够达到30%的感染效率。和逆转录病毒一样存在整合到宿主细胞基因组上的风险,以致引起基因突变、致癌。构建和包装相对简单。
目前腺病毒系统是最好的一种对于所有细胞将外源基因及sirna导入细胞的有效途径。但是,如果是针对个别细胞的研究的话,逆转录病毒、慢病毒甚至直接将带有目的基因的表达质粒转染细胞即可。
本文来自:
ggene.cn
基因时代,生物protocol,为生命科学提供源动力!详细出处参考:http://ggene.cn/html/special/adenovirus/2009/0602/558.html

用慢病毒载体不包装可以直接转染细胞么

主要根据实验目的进行载体的选择。如果想构建稳转株,实现基因的稳定过表达,则需要选择慢病毒,特点是表达时间长,但缺点是此载体包装的目的基因较小,2K以上很难达到比较高的滴度;腺病毒的缺点是免疫原反应高,但是可包装目的基因大,最大可达8K,滴度也能达到10次方以上,与慢病毒相比腺病毒为瞬时表达,一般24h即可表达目的蛋白,但是表达时间较短;如果是体内注射,建议选择AAV,特点为高滴度、免疫原低、表达时间久,可达半年以上

如何利用慢病毒载体构建稳定表达外源基因的细胞系不

真核表达载体包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。 腺病毒载体携带外源基因较大,可瞬时高表达。 慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。
1.将外源基因插入慢病毒载体
2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞
3.收集病毒液
4.用病毒液感染靶细胞
5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法
6.获得稳转株
本文标题: 腺病毒可以构建稳转株吗
本文地址: http://www.lzmy123.com/jingdianwenzhang/164829.html

如果认为本文对您有所帮助请赞助本站

支付宝扫一扫赞助微信扫一扫赞助

  • 支付宝扫一扫赞助
  • 微信扫一扫赞助
  • 支付宝先领红包再赞助
    声明:凡注明"本站原创"的所有文字图片等资料,版权均属励志妙语所有,欢迎转载,但务请注明出处。
    为什么封建制会取代奴隶制 强迫奴隶劳动生产力不更高吗腐团儿COS貂蝉遭吐槽没那味,看历史人物还得去文明与征服?
    Top